储存条件：2-8°C

应用：定量检测小鼠血清、血浆、细胞液、体液以及组织匀浆中IFNγ的含量

（本指标为反向竞争法试剂盒，详细实验原理以英文为准，产品相关文档处可下载详细说明书）

用途：本试剂盒仅供科研使用，不得用于临床及诊断使用！

一． 试剂盒组成

注意：平衡液仅仅适用于标本是细胞液、体液以及组织匀浆样品的检测时所使用

二．样本处理及保存：

1. 血清

采集血清时不加抗凝剂，采集后室温静置1-2小时，1000 × g (或3000 rpm)离心15分钟，取上清，-20℃或-80℃分装保存备用。

2. 血浆

采集血浆，要加入总体积1%的抗凝剂 (EDTA，肝素等)，采集后先室温或4℃静置半小时后，1000 × g (或3000 rpm)离心15分钟，取上清，-20℃或-80℃分装保存备用。

3. 组织裂解液

组织裂解的方式取决于组织的类型，一般来讲，先用预冷的PBS (0.02mol/L, pH 7.0-7.2) 清洗组织后称重。一般0.5g组织加入500ul预冷的PBS (0.02mol/L, pH 7.0-7.2)，在冰上的玻璃容器内研碎。用超声或者反复冻融的方法裂解细胞膜，1500×g (或5000 rpm) 离心15分钟后取上清，-20℃或-80℃分装保存备用。

4. 细胞裂解液

1) 悬浮细胞直接离心取细胞沉淀。贴壁细胞需用胰酶消化后离心取细胞沉淀。检测某些指标时不能用胰酶消化。

2) 用PBS (0.02mol/L, pH 7.0-7.2) 洗3遍。

3) 用少量PBS重悬细胞，超声或者反复冻融的方法裂解细胞膜，1500×g (或5000 rpm) 离心15分钟后取上清，-20℃或-80℃分装保存备用。

5. 细胞上清及体液

1000 × g (或3000 rpm)离心15分钟，取上清，-20℃或-80℃分装保存备用。

三．试剂准备

1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存。

2. 洗液的配制：按1:100的比例配制洗液备用。

四．操作步骤（实验前必须仔细看实验准备）

1. 取出试剂盒，于室温（20-25℃）放置30分钟。

2. 取出酶标板，按照标准品的次序分别加入100 μL的标准品溶液于空白微孔中。

3. 空白微孔中加入100 μL的样品，空白对照加入100 μL的蒸馏水。

4. 加10 μL的平衡液于已加样品的孔中（不含空白对照孔），如果标本是血清或者血浆，此步骤忽略。

5. 在各孔中加入50 μL的酶标记溶液（不含空白对照孔）。

6. 将酶标板用封口胶密封后，37℃孵育反应 1小时（在孵育箱中保持稳定的温度与湿度）。

7. 充分清洗酶标板5次，保持各孔有充足的水压（浓缩洗涤液以1：100的比例与蒸馏水稀释）。

8. 酶标板洗涤后用吸水纸彻底拍干。

9. 各孔加入显色剂A 50 μL。

10. 各孔加入显色剂B 50 μL。

11. 37℃下避光反应10-15分钟。

12. 各孔加入50 μL终止液，终止反应。

13. 将微孔板至于450nm波长的酶标仪下进行读值（吸光度值即为OD值）。

五．实验注意事项

1. 实验操作中必须使用一次性吸头，避免交叉污染。

2. 加样：加样时，要控制加样速度，避免第一孔与最后一孔之间的时间间隔过大，否则将会导致不同的预孵育时间，从而影响实验的准确性以及重复性；一般加样时间控制在10分钟内，如果样本数量过多，可使用多道移液器。

3. 孵育：样品要在密闭的容器内进行孵育，严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。

4. 洗涤：洗涤过程中反应孔中的残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，同时要消除板底残留的液体和手指痕迹，避免影响最后的酶标仪读数。

5. 反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如，10分钟左右），如果颜色较深，请提前加入终止液终止反应。

6. 建议实验前预测样品含量，如样品浓度过高，应对样品进行稀释，计算结果时乘以相应的稀释倍数。

7. 建议使用本试剂盒时先做预实验（即先做标准曲线，试用几个标本），如果对本试剂盒有任何疑问，可和所购经销商联系，如果因运输过程导致试剂盒失效，可要求调换，但概不承担产品本身以外的任何损失。