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iPS细胞
iPS Cells ,多功能诱导干细胞

货号:iCell-DRY0100(STR鉴定)

价格: 4000.0

规格: 5*10 5   

数量: +

细胞名称:DYR0100

细胞描述:将人包皮细胞诱导成 iPS 细胞,通过重编程转录因子为:OCT4、SOX2、KLF4、

MYC 诱导建立 iPS 细胞,培养时无需饲养层细胞。

形 态:球形克隆

来源性别:男性疾 病:健康

年 龄:新生儿

细胞来源:从 ATCC 引进(http://www.atcc.org/

ATCC number: ACS-1011TM

冻存日期/代数:详见 冻存管/培养瓶 标识建议复苏培养体系:1 个 T25 培养瓶

细胞状态:良好

支原体检测结果:阴性

细胞用途:仅供科研使用。

iPS细胞完全培养基培养人胚胎干细胞

1.试剂和材料

iPS细胞完全培养基试剂盒

成分

规格

数量

储存条件

iPS细胞基础培养基

500mL

1瓶

2-8℃

iPS细胞培养基添加剂

5mL复溶

1支

-20℃

所需的其它试剂和材料

产品

规格

货号

品牌

Y27632

1mg

iPSMed-iCell-CA005

iCell

Matrix 

5mL

iPSMed-iCell-CA004

iCell

iPS细胞消化液

500mL

iPSMed-iCell-CA003

iCell

另需细胞培养皿/瓶/板,15mL离心管和移液管等细胞培养耗材

2.培养流程

2.1.复苏

在开始复苏前,将所有试管、预热后的培养基和培养皿准备好,已确保尽快完成复苏过程。

将冻存管从液氮中取出,快速在37℃水浴槽中解冻,轻柔持续地摇动冻存管,直到只剩下一个小冷冻团。从水浴槽取出冻存管,70%乙醇擦拭进行消毒。

使用移液管将冻存管中含有iPS细胞的冻存液轻轻转移至一个含有5-6mL已经预热的完全培养基的15mL离心管中,过程必须轻柔防止吹散细胞团。

室温300g离心5min。

吸出培养基,确保细胞团完整。

然后缓慢加入1mL完全培养基,用手指轻弹离心管底部,使细胞团脱离底部并分散。

轻轻的将此1mL细胞悬液转移至已包被的培养皿/板/瓶,根据最终培养细胞的液体体积,加入ROCK inhibitor Y27632,终浓度为10μM。

将培养皿/板/瓶置于37℃培养箱中,每天更换培养基(换液不需要再添加Y27632,但培养基需提前预热)。

2.2.传代

当集落变得较大、中心变得密集、明亮(对比边缘),相邻的集落开始融合时,此时可进行传代。

传代前, 准备 37 ℃预热好的好无钙镁 PBS 溶液及消化液,完全培养基。

吸走上清,并加入 37℃预热好的 PBS 溶液清洗1次。

加入适量(按 6 孔板每孔加 1ml,6cm 皿加 2ml,10cm 皿加 3ml 的量)的 37℃预热好的消化液。

37℃放置1-2min,用手指轻弹皿/板/瓶身,显微镜下观察到大部分克隆边缘开始脱离培养皿/板底,克隆内部大部分细胞成团脱落。

加入适量的完全培养基终止消化。

移入离心管,300g离心5min,

离心后重悬(重悬步骤参照复苏4-5步)。

传代比例为 1:6—1:8,根据最终培养细胞的液体体积,加入ROCK inhibitor Y27632,终浓度为10μM。

将培养皿/板/瓶置于37℃培养箱中,每天更换培养基(换液不需要再添加Y27632,但培养基需提前预热)。

2.3.冻存

当集落变得较大、中心变得密集、明亮(对比边缘),相邻的集落开始融合时,此时可进行传代。

传代前, 准备 37 ℃预热好的好无钙镁 PBS 溶液及消化液,完全培养基。

吸走上清,并加入 37℃预热好的 PBS 溶液清洗1次。

加入适量(按 6 孔板每孔加 1ml,6cm 皿加 2ml,10cm 皿加 3ml 的量)的 37℃预热好的消化液。

37℃放置1-2min,用手指轻弹皿/板/瓶身,显微镜下观察到大部分克隆边缘开始脱离培养皿/板底,克隆内部大部分细胞成团脱落。

加入适量的完全培养基终止消化。

移入离心管,300g离心5min。

离心后重悬(重悬步骤参照复苏4-5步)。

使用预冷的冻存液轻轻的重悬细胞团,然后将细胞悬液转移至冻存管,冻存按 6 孔板每孔冻 1 支,6cm 皿冻 2-4 支,10cm 皿冻 6-12 支(冻存液为:90% iPS细胞完全培养基与 10%的DMSO。

iPS细胞相关产品及说明书如下:                           

iPS细胞消化液

matrix基质胶使用说明书

Y27632

iCell人诱导多能干细胞(iPSC)培养体系    

序号产品名称货号规格售价(元)备注
1

iPS细胞复苏专用因子

ipsMed-iCell-CA005

1mg2780产品相关文档下载
2

iPS细胞解冻(复苏)培养基

ipsMed-iCell-CA002

100ml1290产品相关文档下载
3

iPS细胞完全培养基

ipsMed-iCell-001

500ml2380产品相关文档下载
4

iPS细胞消化液

ipsMed-iCell-CA003

500ml420产品相关文档下载
5

matrix基质胶

ipsMed-iCell-CA004

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1. iPS细胞培养说明书(1).docx   下载
2. iPS细胞完全培养基说明书(2).docx   下载
3. iPS细胞消化液说明书(3).docx   下载
4. Matrix说明书(4).docx   下载
5. Y27632专用因子说明书(5).docx   下载
注意事项

1、每次换液时要观察细胞生长状况以及细胞形态的变化并对细胞进行拍照,但是在培养箱外操作的时间不要过长,避免因温度对细胞生长状态造成不利影响。

2、更换培养基之前,要对新的培养基进行37℃预热。为了避免反复加热培养基而造成的培养基中各种成分的影响,只对本次要更换的量进行预热处理。

3、用移液器吹打细胞,因为移液管的端部较为圆滑,对细胞伤害的程度小于用1ml的枪。

4、细胞密度达到80-90%时要及时传代,否则会造成细胞形态的变化。但是,如果细胞在铺板时混合不均匀,而形成部分集落过大的情况,即使没有达到80-90%也要进行传代。

合作单位: