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小鼠肺微血管内皮细胞的分离培养方法
作者:    日期:2025-02-27

小鼠肺微血管内皮细胞构成半选择性屏障,该屏障对于肺气体交换,调节液体和可溶物在血液与肺间质之间的流动具有重要意义。它还具有代谢功能,可以执行一定的非呼吸功能。在肺损伤中,肺微血管内皮细胞是活性氧类的重要靶细胞之一。

在肺炎的发生过程中,神经体液介质和氧化剂作用于内皮细胞,使得细胞间隙渗透性增加,蛋白质由血液进入间质。细胞间隙渗透性的增加导致低氧血症,出现成人呼吸窘迫综合征和非心源性肺水肿。

小鼠肺微血管内皮细胞来源于实验动物的正常肺组织,细胞为上皮样,多角形细胞,贴壁培养,采用CD31免疫荧光染色鉴定为阳性,细胞纯度高于90%,不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

1.试验所需仪器设备及试剂

(1)仪器

仪器名称

规格型号

生物安全柜

BSC-1500ⅡA2-X

CO2细胞培养箱

BC-J160S

荧光倒置显微镜

DS-Ri2

高速冷冻离心机

Multifuge X1R

电热恒温鼓风干燥箱

DHG-9123A

电热恒温震荡水槽

DK-2B

 

 

 

 

 

 

 


(2)试剂耗材

试剂名称

规格/货号

T25细胞培养瓶

430639

血球计数板

Neubauer improved

24孔板专用细胞爬片

YA0350

细胞培养孔板

WHB-24

胎牛血清

1414426

内皮细胞培养基

Primed-icell-002

0.25%胰蛋白酶(含0.02%EDTA)

1734858

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2、小鼠肺微血管内皮细胞的分离培养方法

1) 将5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中,移入生物安全柜,

2) 从胸部解剖乳鼠,取出双肺置于预冷的PBS中,尽可能的除去结缔组织等,

3) 取肺边缘部分,剪碎,将组织块移入T25培养瓶中,倒置于细胞培养箱中,

4) 2h后,培养瓶中注入2 mL内皮培养基,小心将培养瓶正置于培养箱,确保组织块不会飘起来,

5) 每3d换液2mL,待细胞从组织块中爬出来后,隔2d换液,待细胞融合达到60-70%左右时,去除组织块,将肺微血管内皮细胞重新铺瓶。

合作单位: