关于血清，您需要知道的事

血清是血液凝固析出的淡黄色透明液体，是血浆去除纤维蛋白后的混合 物，主要成分包括蛋白质、氨基酸、糖类、维生素和多肽（如生长因子、胰岛 素、促生长激素）等。血清是细胞培养过程中重要的营养物质，同时也对细胞 起到一定的保护作用。

血清中的沉淀是什么？

用于细胞培养的各种血清产品中都存在各种类型的沉淀。除了胆固醇和一 些蛋白沉淀之外，血清中也会含有纤维蛋白和磷酸钙。虽然沉淀可引起初始问 题，但在细胞培养应用方面，沉淀一般不会对血清的性能产生影响。

1. 纤维蛋白

肉眼可见的较大物质，可达 1-2mm。血清是在低温条件下收集并迅速加工 处理，导致一些纤维蛋白原仍存在于溶液中。虽然过滤去除了绝大部分的纤维 蛋白，但解冻过程中，纤维蛋白原会再次转化成纤维蛋白析出，形成沉淀。

1. 血 清沉 淀（ 纤维 蛋白 ）

2. 倒 置显 微镜 下观 察的 血清 沉淀 （纤 维蛋 白 ）

2. 磷酸钙

一种常见的沉淀物，表现为云状。通过倒置显微镜观察，会发现许多小黑 点。由于布朗运动，这些黑点可自由移动，因此常被误认为是细菌污染。

图 3. 倒 置显 微镜 下观 察的 磷酸 钙颗 粒（ 圆圈 内 标识 的小 黑点 ）

3. 其他：

胆固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白质。

血清沉淀是污染吗？

无论是较大的絮状纤维蛋白还是小黑点样的磷酸钙，都容易被误认为是细 菌污染，但其实血清沉淀并不是污染。由于在 37℃的温度下培养，会加剧纤维 蛋白的析出和磷酸钙颗粒产生，可采用空培方式验证污染，血清按所需比例加 入无菌培养基中（不加双抗），放培养箱中过夜，观察空培外观，若为澄清， 则血清无污染。 还可以通过将血清接种在细菌培养基上进行培养，观察是否存在细菌增 殖，并且进行革兰氏染色，用油镜观察直接判断是否为微生物污染。

血清沉淀会影响细胞生长吗？

血清出现沉淀是血清的正常特性，各大品牌的血清均有沉淀的出现，过于 澄清的血清并不代表更高的品质，也可能是在加工过程中提前进行“预老 化”，即反复冻融尽可能的去除纤维蛋白原的结果。 血清沉淀的多少与血清的使用效果没有必然关系，血清沉淀并不会影响细 胞的正常生长。

血清沉淀增多的原因

① 血清热灭活；

② 37℃ 孵育；

③ 频繁的解冻与冻存操作；

④ 解冻过程中未混合；

⑤ 经 γ-辐照；

⑥ 2-8℃ 长时间储存；

⑦ 在自动解冻的冰箱中储存。

去除沉淀的方法

如果血清中含有沉淀，不建议直接过滤血清。若去除这些絮状沉淀物，可将 血清分装至无菌离心管中，以 400g 离心 5min，去除大颗粒沉淀，上清液加入培 养基内一起过滤。

图 4. 血 清沉 淀离 心后

如何减少沉淀产生？

正确的解冻方法

① 2-8℃解冻；

② 解冻过程中隔一段时间轻柔摇匀；

③ 在室温或 37℃水浴锅中溶解容易造成沉淀增多。

正确使用和保存

① 非必须不用热灭活，热灭活会使血清中部分蛋白质变性析出，影响血清 品质；

② 避免 2-8℃长期保存，分装后-20℃长期保存，按需溶解，避免反复冻 融。

③ 不建议在-80℃长期保存，-80℃会增大血清包装瓶破裂的风险，另一方 面解冻时巨大的温度变化会导致产生更多的沉淀。

④ 避免紫外线照射；

综上所述，在我们培养细胞的过程中，血清出现沉淀是正常情况，无论是 较大的絮状纤维蛋白还是小黑点样的磷酸钙，都不是污染，且沉淀不会影响细 胞的培养效果，可以放心使用。