产品描述

本产品为iCell团队精心优化的间充质干细胞成脂诱导分化试剂盒，可增强间充质干细胞向成脂细胞分化的能力。

本产品仅用于科研用途，不可用于诊断、治疗、临床、家庭及其他用途。

产品组成成分及保存

注意：

1.为保证产品的有效性，请避免反复冻融。

2.配制好的诱导培养基保存于2-8℃，有效期为2周，请根据实验用量合理配制。

产品使用说明

1. 成脂诱导分化完全培养基的配制

①室温条件下融化各因子及血清。各因子融化后，瞬时离心，使溶液集中于离心管底部。（注意：若因子或血清中有沉淀物，属正常现象，无须过滤，避免成分丢失。）

②根据实验用量，于无菌操作台中配制诱导分化完全培养基，建议每次配制50mL，配制比例见下表：

2. 成脂诱导分化实验步骤

①建议取第3~5代、纯度达90%以上、状态良好的间充质干细胞，将其消化下来，离心收集，使用含10%FBS的完全培养基调整细胞密度，均匀铺于培养瓶/板中，置于37℃5%CO2，饱和湿度的培养箱中培养。（细胞接种详情参考表二）

表二 

②待细胞汇合度达80%~100%时，即可进行诱导分化。

③小心吸弃细胞培养上清，沿孔壁缓慢加入提前配制好的诱导分化完全培养基，置于37℃恒温细胞培养箱中培养。（注意：完全培养基加入细胞前需提前置于37℃预热。）

④每2~3day换用新鲜的诱导分化完全培养基。换液时，若细胞培养上清颜色变为澄清的黄色，是由于细胞量较大，培养基消耗较快导致的，请及时缩短换液周期。（注意：完全培养基加入前需提前置于37℃预热。）

⑤细胞诱导3周后，即可进行油红O染色鉴定。

3. 油红染色分析

①细胞诱导分化结束后，小心吸弃细胞培养上清，1×PBS润洗1~2次。加入适量细胞固定液，室温固定30 min。（细胞固定液为4%中性甲醛溶液等，体积参考表二）

②配制油红O工作液：油红O贮存液与蒸馏水按照3：2配制，（例：油红O贮存液3mL，蒸馏水2mL），混匀。使用滤纸过滤，收集滤液，即为油红O工作液。（注意：成脂细胞内的油滴极易脱落，操作时须谨慎。）

③细胞固定完成后，吸弃细胞固定液，1×PBS润洗2次。沿孔壁缓慢加入适量油红O工作液，室温染色30min。（注意：油红O工作液底部可能会有沉淀，吸取时尽量不要触及底部。若细胞染色后有沉淀，PBS洗去即可。）

④吸出染色液，PBS润洗，去掉浮色。显微镜下观察细胞染色效果。细胞内油滴着色，呈红色。（注意：油红O工作液不可重复使用，不建议回收。）

成脂细胞油红染色（图片仅供参考）

左图：100倍；右图：200倍

质量控制

ü 无菌检测（细菌、真菌和支原体检测）

ü pH测试

ü 渗透压检测

ü 内毒素

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