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关于血清,您需要知道的事
作者:赛百慷    日期:2022-07-18

关于血清,您需要知道的事

血清是血液凝固析出的淡黄色透明液体,是血浆去除纤维蛋白后的混合 物,主要成分包括蛋白质、氨基酸、糖类、维生素和多肽(如生长因子、胰岛 素、促生长激素)等。血清是细胞培养过程中重要的营养物质,同时也对细胞 起到一定的保护作用。

血清中的沉淀是什么?

用于细胞培养的各种血清产品中都存在各种类型的沉淀。除了胆固醇和一 些蛋白沉淀之外,血清中也会含有纤维蛋白磷酸钙。虽然沉淀可引起初始问 题,但在细胞培养应用方面,沉淀一般不会对血清的性能产生影响。

1. 纤维蛋白

肉眼可见的较大物质,可达 1-2mm。血清是在低温条件下收集并迅速加工 处理,导致一些纤维蛋白原仍存在于溶液中。虽然过滤去除了绝大部分的纤维 蛋白,但解冻过程中,纤维蛋白原会再次转化成纤维蛋白析出,形成沉淀。



1. 血 清沉 淀( 纤维 蛋白 )




2. 倒 置显 微镜 下观 察的 血清 沉淀 (纤 维蛋 白 )

2. 磷酸钙

一种常见的沉淀物,表现为云状。通过倒置显微镜观察,会发现许多小黑 点。由于布朗运动,这些黑点可自由移动,因此常被误认为是细菌污染。




图 3. 倒 置显 微镜 下观 察的 磷酸 钙颗 粒( 圆圈 内 标识 的小 黑点 )

3. 其他:

胆固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白质。

血清沉淀是污染吗?

无论是较大的絮状纤维蛋白还是小黑点样的磷酸钙,都容易被误认为是细 菌污染,但其实血清沉淀并不是污染。由于在 37℃的温度下培养,会加剧纤维 蛋白的析出和磷酸钙颗粒产生,可采用空培方式验证污染,血清按所需比例加 入无菌培养基中(不加双抗),放培养箱中过夜,观察空培外观,若为澄清, 则血清无污染。 还可以通过将血清接种在细菌培养基上进行培养,观察是否存在细菌增 殖,并且进行革兰氏染色,用油镜观察直接判断是否为微生物污染。

血清沉淀会影响细胞生长吗?

血清出现沉淀是血清的正常特性,各大品牌的血清均有沉淀的出现,过于 澄清的血清并不代表更高的品质,也可能是在加工过程中提前进行“预老 化”,即反复冻融尽可能的去除纤维蛋白原的结果。 血清沉淀的多少与血清的使用效果没有必然关系,血清沉淀并不会影响细 胞的正常生长。

血清沉淀增多的原因

① 血清热灭活;

② 37℃ 孵育;

③ 频繁的解冻与冻存操作;

④ 解冻过程中未混合;

⑤ 经 γ-辐照;

⑥ 2-8℃ 长时间储存;

⑦ 在自动解冻的冰箱中储存。

去除沉淀的方法

如果血清中含有沉淀,不建议直接过滤血清。若去除这些絮状沉淀物,可将 血清分装至无菌离心管中,以 400g 离心 5min,去除大颗粒沉淀,上清液加入培 养基内一起过滤。


图 4. 血 清沉 淀离 心后

如何减少沉淀产生?

正确的解冻方法

① 2-8℃解冻;

② 解冻过程中隔一段时间轻柔摇匀;

③ 在室温或 37℃水浴锅中溶解容易造成沉淀增多。

正确使用和保存

① 非必须不用热灭活,热灭活会使血清中部分蛋白质变性析出,影响血清 品质;

② 避免 2-8℃长期保存,分装后-20℃长期保存,按需溶解,避免反复冻 融。

③ 不建议在-80℃长期保存,-80℃会增大血清包装瓶破裂的风险,另一方 面解冻时巨大的温度变化会导致产生更多的沉淀。

④ 避免紫外线照射;

综上所述,在我们培养细胞的过程中,血清出现沉淀是正常情况,无论是 较大的絮状纤维蛋白还是小黑点样的磷酸钙,都不是污染,且沉淀不会影响细 胞的培养效果,可以放心使用。


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