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小鼠支气管平滑肌细胞的分离培养方法
作者:赛百慷    日期:2019-12-27

平滑肌即无纹肌的通称,平滑肌是由长纺锤形的单核细胞构成。它不构成独立的器官,而只是成为构成体壁和内脏壁的因素(肌层)。平滑肌细胞互相连接,形成管状结构或中空器官;在功能上可以通过缩短和产生张力使器官发生运动和变形,也可产生连续收缩或紧张性收缩,使器官对抗所加负荷而保持原有的形状。

小鼠支气管平滑肌细胞的收缩、舒张、增殖和凋亡与临床许多疾病的病理生理过程有关.如支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病等。例如在哮喘发病时,可以检测到气管平滑肌发生数目的增生和肥大,表型也发生改变,由收缩型转为合成型与分泌型,并分泌多种与细胞因子;而且出现向气管腔迁移的迹象。

 

小鼠支气管平滑肌细胞来源于实验动物正常支气管组织长梭状细胞,贴壁培养。通过平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光染色鉴定为阳性鉴定纯度高于90%不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

 

1.试验所需仪器设备及试剂

(1)仪器

仪器名称

规格型号

厂家

生物安全柜

BSC-1500ⅡA2-X

济南鑫贝西生物技术有限公司

CO2细胞培养箱

BC-J160S

上海博迅实业有限公司

荧光倒置显微镜

DS-Ri2

Nikon

高速冷冻离心机

Multifuge X1R

Thermo Fisher

电热恒温鼓风干燥箱

DHG-9123A

上海精宏实验设备有限公司

(2)试剂耗材

试剂名称

规格/货号

厂家

T25细胞培养瓶

430639

Coming

血球计数板

Neubauer improved

Marienfeld

细胞培养孔板

WHB-24

上海卧宏生物科技有限公司

平滑肌细胞完全培养基

PriMed-iCell-004

赛百慷(上海)生物技术股份有限公司

0.25%胰蛋白酶(含0.02%EDTA)

1734858

Gibico

 

2.小鼠支气管平滑肌细胞的分离培养

1) 取4-5周龄的小鼠,断颈处死后,泡于75%的酒精中,

2) 剖开胸腔,取出完整气管及肺组织,放入无菌PBS中,

3) 在体视显微镜下,小心分离出下游支气管,

4) 用眼科剪及镊子分离肌层并剪碎,

5) 加入0.1% I + II + IV + dispase,4℃过夜消化,

6) 第二天置于37℃水浴摇床中消化2~3h,

7) 待液体变浑浊后加入完全培养基终止消化,充分吹打,

8) 过100目筛网,收集滤液,1000rpm离心5min,弃去上清,

9) 用完全培养基重悬沉淀,铺瓶。

除了上述的细胞分离方法以外,赛百慷还有很多关于其他细胞的分离方法,想要学习的小伙伴可以来赛百慷进行现场学习,如果想要其他原代分离培养方法,可在购买相应的细胞过程中,赠送该细胞的分离方法及培养条件,想要了解更多,打电话或咨询相关工作人员。

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